کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن tat-nef در باکتری اشرشیاکلی صورت گرفت. تأیید بیان پروتئین توسط آنالیز وسترن بلات و تخلیص آن از طریق روش رنگ آمیزی معکوس انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا کلونینگ فیوژن tat-nef در وکتور بیانی pgex6p2 صورت گرفت. سپس القای بیان پروتئین نوترکیب tat-nef در باکتری اشرشیا کلی سویه bl21 (de3) توسط القا کننده iptg انجام شد. تأیید بیان از طریق تکنیک sds-page و وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی منوکلونال ضد nef صورت گرفت. سپس، تخلیص پروتئین فیوژن توسط تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد. یافته ها: نتایج آنالیز pcr و هضم آنزیمی، وجود باند واضح حدود 726 جفت باز را روی ژل آگارز تأیید کرد که نشان گر کلونینگ صحیح فیوژن tat-nef در وکتور بیان پروکاریوتی pgex6p2 بود. هم چنین، وجود باند پروتئینی حدود 54 کیلودالتون روی ژل sds-page نشان گر بیان پروتئین tat-nef بود که توسط آنتی بادی منوکلونال ضد nef در آنالیز وسترن بلات تأیید شد.  نتیجه گیری: پروتئین فیوژن نوترکیبtat-nef تخلیص شده به عنوان یک آنتی ژن برای طراحی واکسن پروتئینی در مقابل  عفونت ویروس hiv استفاده خواهد شد.